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IHC、ELISA 與 WB 實驗之間的區別?

2元彩票中500万的 www.chmhhq.tw 關鍵詞: IHC ELISA WB 2015-07-03 16:53 來源:丁香園論壇 點擊次數:29751

免疫組化、Western、ELISA,免疫學三大工具,分別用于定位,定性和定量。

IHC(免疫組化Immunohistochemistry)

是融合了免疫學原理(抗原抗體特異性結合)和組織學技術(組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等),通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色,來對組織(細胞)內抗原進行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。樣本是細胞或組織,要在顯微鏡下觀察結果,可能出現膜陽性、質陽性和核陽性。

ELISA(酶聯免疫吸附試驗Enzyme linked immunosorbent assay)

用到了免疫學原理和化學反應顯色,待測的樣品多是血清、血漿、尿液、細胞或組織培養上清液,因而沒有用到組織包埋、切片等技術,這是與免疫組化的主要區別,操作上 開始需要將抗原或抗體結合到固相載體表面,從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復合物粘附在載體上,這就是“吸附”的含義。

WB (蛋白質印跡Western Blot)

先要進行SDS-PAGE,然后將分離開的蛋白質樣品用電轉儀轉移到固相載體上,而后利用抗原-抗體-標記物顯色來檢測樣品,可以用于定性和半定量。

對于IHC來說,定位是免疫組化最大的優勢

該方法可在組織和細胞中進行抗原的準確定位,因而可同時對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察,這樣就可以進行形態與功能相結合的研究,相比于其他蛋白檢測方法,免疫組化具有定位較直接準確、定性靈敏度高,是定位檢測分析首選方法對病理學領域開展深入研究是十分有意義,尤其對于有些因子的轉位研究十分有用。

WB與IHC技術相比,定量可能更加準確

當然WB也可定性和定位(通過提取膜蛋白或核蛋白、胞漿蛋白分別檢測其中抗原含量,進而間接反映它們的定位),但敏感性遠遠低于IHC。

ELISA與免疫組化技術相比,定量最準確,是分泌性蛋白檢測首選方法之一。

尤其對于微定量分析多個樣本非常有用,所用試劑和樣品量很少,結果精確。IHC針對性比較強,而且一般是以組織或者細胞為樣本,而ELISA一般是使用血清或者組織磨碎液。免疫組化可以快速檢測樣本中抗體的陽性或者陰性,一般不用于定量檢測

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